金鹰国际娱乐APP,

服務熱線

+8610-84928167

凍存和複蘇

保种服务是指,通过在液氮中保存实验动物的配子或胚胎,从而实现以较小的成本维持动物模型核心种群的方法。金鹰国际娱乐APP通过冻存精子,胚胎或卵巢组织,需要时再复苏成活体动物,确保客户种质资源的安全。


1.胚胎凍存

胚胎凍存是最早的和最安全的保存实验动物品系的方法。影响胚胎冷冻保存成功的三个重要方面包括:①胚胎的数量;②复苏后存活胚胎的数量;③胚胎移植后存活的成年动物数量。

金鹰国际娱乐APP建议客户每个品系冻存约200~300枚2cell、8cell或桑囊胚时期的胚胎,每管30枚左右,即8~10管胚胎放入液氮中保存。胚胎的来源,既可以通过超数排卵的方法,或者通过體外受精(IVF)的方法获得。当然,也可以与品系淨化结合起来,这样可以节约获得足量数目胚胎的准备成本。


該技術的流程包括:

①胚胎采集。金鹰国际娱乐APP建议冻存2-cell胚胎。若2-cell胚胎复苏效果不佳,再考虑冻存8cell或桑囊胚时期的胚胎。

②胚胎清洗。我們采用國際胚胎移植協會的建議方案進行清洗,目的是防止胚胎被微生物感染。

③胚胎凍存。采用玻璃化冷冻进行,按照标准的流程经过冻存保护液处理后,投入液氮保存。

④复苏验证。冻存一周后,我们取出1支验证管的胚胎进行复苏,若胚胎存活率和囊胚发育率20~100%(野生型B6小鼠胚胎复苏率在80%以上,不同品系间存在差异),或胚胎移植后有健康小鼠出生,表明胚胎冷冻保存成功。若2-cell复苏存活率小于50%,我们会及时与客户沟通,更改为8-cell或桑囊胚期胚胎凍存。

⑤長期保存。驗證保存成功的品系,放入專用的胚胎保存液氮罐中(一般分布于2個液氮罐),長期保存。


2.精子凍存 

精子凍存,在保种服务中广泛应用,其优势在于技术成熟,成本低,容易操作等特点。通过无菌手术分离可育雄鼠的附睾,在特定的溶液进行精子的游离,并加入专用的冷冻保护液,通过麦管冷冻保存在液氮中。

建議客戶每個品系提供2~3只12周至4月齡的可育成年小鼠,凍存15~20支麥管的精液。

 

3.品系恢複

在基因修饰动物模型的使用过程中,由于各种原因造成该品系的繁育出现障碍,如由于老龄化造成精子活力的降低,或由于疾病或意外造成繁育期动物生命垂危,这时可以通过金鹰国际娱乐APP提供胚胎复苏、精子复苏,或者輔助生殖技术进行动物品系的恢复。

(1)胚胎複蘇

凍存的胚胎按照標准程序複蘇後,移植到代孕大小鼠的輸卵管或子宮內,得到活體後代的過程。

(2)精子複蘇

體外受精是指将成熟的卵子和获能的精子在体外进行受精的过程。金鹰国际娱乐APP有丰富的作體外受精的经验,建议精子活力大于30%时,直接采用體外受精方法复苏后代。

(3)辅助透明带切开體外受精

辅助透明带切开是指获得的精子活力小于30%时,精子不能顺利穿过透明带,采用传统的方法不能得到受精卵时,对卵母細胞的透明带进行打孔或切开,从而获得受精卵的方法。金鹰国际娱乐APP可以采用Xyclone激光破膜仪进行透明带打孔,或者用专用的尖针将透明带切开,两种方法均可得到较高的受精率。